ELISA常见问题

▶ELISA 测定中可能会出现的问题及解决方法

2022-02-24

问  题可能的原因解决方法
1.非常弱的结果(1)温育的时间或温度不够;(2)显色反应时间太短;(3)所用配制缓冲液的蒸馏水有问题;(4)加入抗体/酶的稀释液浓度太低;(5)酶标仪滤光片不正确;(6)不正确的试剂储存方式;(7)试剂盒没有充分平衡;(8)移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。校正温育箱温度;校正定时钟准确定时;使用新鲜合格的蒸馏水;按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液;试剂室温平衡至少 20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃);校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,最好一次性使用。

2.标准曲线和测定的重复性差这是典型的由测定操作引起的问题,包括(1)加样本及试剂量不准;孔间不一致;(2)加样过快,孔间发生污染;(3)加错样本;(4)加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区;(5)不同批号试剂盒中组分混用;(6)温育时间、洗板、显色时间不一致;(7)孔内污染杂物;(8)酶标仪滤光片不正确;(9)试剂/样品没有混匀;(10)血清标本未完全凝固即加入,反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞,易出现假阳性反应等。重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近;重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性;样品稀释前应充分混匀;尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。
3.白板(阳性对照不显色)(1)漏加酶结合物;(2)洗板液配制中出现问题,如量筒不干净,含酶抑制物(如叠氮钠)等;(3)添加的试剂错误或者被遗漏;(4)试剂过期;请按说明书所示稀释倍数配制;注意不要漏加;每次加液前均应核对标签。
4.空白背景高(1)洗板不干净;(2)显色液变质;(3)试剂过期;(4)不正确的试剂稀释液,如加酶的浓度过高;浓缩洗液准确配制;50 倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤,彻底拍干;加样或加酶拍板


在线客服

关闭
在线客服