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羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒ㅣELISA 系列

2023-04-13

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)引起的一种急性接触性传染病,其特征为口腔、舌黏膜糜烂、流泪、流鼻涕。本病的易感动物为山羊,也可感染绵羊、白尾鹿等,但对牛无感染。世界卫生组织将小反刍兽疫列为需要通报的动物传染病,我国将其列为一类动 物传染病,为国家免疫计划书中强制免疫的疫病之一。

 

【原    理】

    本试剂盒系由预包被小反刍兽疫病毒重组抗原的酶标板、抗体工作液、酶标记物及其他配套试剂组成,应用竞争酶联免疫法(ELISA)原理检测羊血清、血浆样本小反刍兽疫病毒抗体。实验时在酶标板中加入待检样本和抗体工作液,经温育后洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,若样品中含有小反刍兽疫病毒抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合,从而使后续反应不出现显色;反之则出现显色;显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值, 即可知样品是否含有小反刍兽疫病毒抗体。

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 【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl;样品孔每孔先加入40μl工作洗涤液,再加入10μl血清样本。

4.每孔加抗体工作液50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃反应30分钟。

5.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,37℃避光反应15分钟。

9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。



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