▎  HAS2 概述
透明质酸或透明质酸(HA)是一种高分子量的无支链多糖,由从细菌到哺乳动物的各种生物体合成,是细胞外基质的组成部分。它由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺残基组成,通过β-1-3和β-1-4糖苷键连接。HA由质膜内表面的膜结合合酶合成,链通过孔状结构挤出到细胞外空间。它具有多种功能,包括空间填充、关节润滑以及提供细胞可以迁移的基质。HA在伤口愈合和组织修复过程中积极产生,为血管和成纤维细胞的向内生长提供框架。HA血清浓度的变化与类风湿性关节炎等炎症和退行性关节病有关。此外,HA与白细胞受体CD44的相互作用在白细胞的组织特异性归巢中很重要,HA受体的过表达与肿瘤转移有关。HAS2是新鉴定的脊椎动物基因家族的成员,编码推定的透明质酸合成酶,其氨基酸序列与非洲爪蟾的糖胺聚糖合成酶(DG42)以及人类和小鼠透明质酸合酶1具有显著同源性。
▎  用途
该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中HAS2浓度。
▎  检测原理
将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体,将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
反应类型  | 双抗夹心法  | 
规格  | 96T/48T  | 
中文名称  | 人透明质酸合酶2(HAS2)ELISA试剂盒 | 
反应时间  | 1.5 h  | 
检测方法  | 酶联免疫吸附测定 | 
检测范围  | 25 U/L – 800 U/L | 
灵敏度
   | 1.0 U/L | 
上样体积  | 50 μL/孔  | 
样本类型
   | 血清、血浆、组织、细胞上清或其他生物样本  | 
▎  特异性
可检测样本中的 HAS2 , 且与其它类似物无明显交叉反应。
▎  重复性
板内,板间变异系数均<10%。
▎  标曲图

▎  批内差
取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
▎  批间差
选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值
▎  精密度
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%)=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%
▎  稳定性
经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
▎  试剂盒的组成
▲未开封试剂盒,4℃保存;已开封,标准品-20℃保存,酶标板加干燥剂后密封-20℃保存,其他4℃保存。
英文名称  | 中文名称  | 规格  | 规格  | 
Microelisa stripplate  | 包被微孔板  | 96T  | 48T  | 
Standard  | 标准品  | 0.3ml/管*6  | 0.3ml/管*6  | 
HRP-Corjugate  | HRP标记抗体  | 10mL  | 5mL  | 
Sample Diluent  | 样本稀释液  | 6mL  | 3mL  | 
Chromogen SolutionA  | 底物液A  | 6mL  | 3mL  | 
Chromogen SolutionB  | 底物液B  | 6mL  | 3mL  | 
Stop Solution  | 终止液    | 6mL  | 3mL  | 
20× Wash Solution  | 20×浓缩洗涤液  | 25mL  | 15mL  | 
Product Description  | 说明书  | 1份  | 1份  | 
Sealing film  | 封板膜  | 2张  | 2张  | 
▎  实验所需自备物品
1、450±10nm滤光片酶标仪(建议仪器使用前预热)  
2、高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   
3、Eppendorf 移液器.   
4、蒸馏水或去离子水.   
5、脱脂棉吸水纸.   
6、37℃恒温箱.  
7、100ml和1000ml量筒.