▎  CCL5 概述
趋化因子配体5(CCL5),这个基因是定位于17号染色体q臂上的多个趋化因子基因之一。趋化因子是由分泌蛋白组成的超家族,参与免疫调节和炎症反应。根据成熟肽N端半胱氨酸残基的排列方式,该超家族被分为四个亚家族。此趋化因子属于CC亚家族,可作为血单核细胞、记忆性辅助性T细胞和嗜酸性粒细胞的趋化因子。它能引起嗜碱性粒细胞释放组胺并激活嗜酸性粒细胞。此细胞因子是由CD8+细胞产生的主要HIV抑制因子之一。它是趋化因子受体趋化因子(C-C基序)受体5(CCR5)的天然配体之一,并能抑制体外R5型HIV-1毒株的复制,该毒株以CCR5为共受体。可变剪接会产生多种转录变体,编码不同的异构体。
▎  别名
SISd; eoCP; SCYA5; RANTES; TCP228; D17S136E; SIS-delta
▎  用途
该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中CCL5浓度。
▎  检测原理
将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体,将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
| 反应类型 | 双抗夹心法 | 
| 规格 | 96T/48T | 
| 中文名称 | 大鼠正常T细胞表达和分泌因子/趋化因子配体5(CCL5)ELISA试剂盒 | 
| 反应时间 | 1.5 h | 
| 检测方法 | 酶联免疫吸附测定 | 
| 检测范围 | 12.5 pg/mL – 400 pg/mL | 
| 灵敏度
 | 1.0 pg/mL | 
| 上样体积 | 50 μL/孔 | 
| 样本类型
 | 血清、血浆、组织、细胞上清或其他生物样本 | 
▎  特异性
可检测样本中的CCL5, 且与其它类似物无明显交叉反应。
▎  重复性
板内,板间变异系数均<10%。
▎  标曲图

▎  批内差
取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
▎  批间差
选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值
▎  精密度
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%)=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%
▎  稳定性
经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
▎  试剂盒的组成
▲未开封试剂盒,4℃保存;已开封,标准品-20℃保存,酶标板加干燥剂后密封-20℃保存,其他4℃保存。
| 英文名称 | 中文名称 | 规格 | 规格 | 
| Microelisa stripplate | 包被微孔板 | 96T | 48T | 
| Standard | 标准品 | 0.3ml/管*6 | 0.3ml/管*6 | 
| HRP-Corjugate | HRP标记抗体 | 10mL | 5mL | 
| Sample Diluent | 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 
| Chromogen SolutionA | 底物液A | 6mL | 3mL | 
| Chromogen SolutionB | 底物液B | 6mL | 3mL | 
| Stop Solution | 终止液   | 6mL | 3mL | 
| 20× Wash Solution | 20×浓缩洗涤液 | 25mL | 15mL | 
| Product Description | 说明书 | 1份 | 1份 | 
| Sealing film | 封板膜 | 2张 | 2张 | 
▎  实验所需自备物品
1、450±10nm滤光片酶标仪(建议仪器使用前预热)  
2、高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   
3、Eppendorf 移液器.   
4、蒸馏水或去离子水.   
5、脱脂棉吸水纸.   
6、37℃恒温箱.  
7、100ml和1000ml量筒.
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