Human SHH ELISA Kit（ 人音猬因子ELISA试剂盒）

▎  SHH 概述

该基因编码一种在早期胚胎形成中起重要作用的蛋白质。它被认为是腹侧神经管、前后肢轴和腹侧体节图案化的关键诱导信号。在三种与果蝇声刺猬蛋白在序列和功能上相似的人类蛋白质中，这种蛋白质是最相似的。该蛋白质是作为自催化裂解的前体制成的；N-末端部分是可溶的并且包含信号活性，而C-末端部分参与前体加工。更重要的是，C末端产物将胆固醇部分共价连接到N末端产物上，将N末端产物限制在细胞表面，并防止其在整个发育中的胚胎中自由扩散。这种蛋白质或其信号通路的缺陷是前脑无裂畸形（HPE）的原因，这是一种发育中的前脑无法正确分离为左右半球的疾病。HPE表现为面部畸形。人们还认为，该基因或其信号通路的突变可能是VACTERL综合征的原因，其特征是椎体缺陷、肛门闭锁、气管食管瘘伴食管闭锁、桡骨和肾发育不良、心脏异常和肢体异常。此外，位于该基因上游约1兆碱基的长程增强子突变会破坏肢体模式，并可能导致前轴多指畸形。

▎  别名

TPT; HHG1; HLP3; HPE3; SMMCI; ShhNC; TPTPS; MCOPCB5

▎  用途

该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中SHH浓度。

▎  检测原理

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

▎  特异性

可检测样本中的SHH, 且与其它类似物无明显交叉反应。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  标曲图

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

▎  精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

▎  稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

▎  试剂盒的组成

▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。

▎  实验所需自备物品

1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  

2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   

3、Eppendorf 移液器.   

4、蒸馏水或去离子水.   

5、脱脂棉吸水纸.   

6、37℃恒温箱.  

7、100ml和1000ml量筒.