Human AKT1 ELISA Kit（人AKT蛋白1/RACα丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ELISA试剂盒）

▎  AKT1 概述

该基因编码人类AKT丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶家族的三个成员之一，通常被称为蛋白激酶Bα、β和γ。这些高度相似的AKT蛋白都有一个N端pleckstrin同源结构域、一个丝氨酸/苏氨酸特异性激酶结构域和一个C端调控结构域。这些蛋白质被磷酸肌醇3-激酶（PI3K）磷酸化。AKT/PI3K是许多信号通路的关键组成部分，这些通路涉及膜结合配体的结合，如受体酪氨酸激酶、G蛋白偶联受体和整合素连接激酶。因此，这些AKT蛋白调节各种各样的细胞功能，包括正常和恶性细胞中的细胞增殖、存活、代谢和血管生成。在PI3K磷酸化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（PIP2）后，AKT蛋白被磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸（PIP3）募集到细胞膜上。苏氨酸残基308和丝氨酸残基473的后续磷酸化是该基因编码的AKT1蛋白完全激活所必需的。其他残基的磷酸化也会发生，例如，对胰岛素生长因子-1和表皮生长因子的反应。蛋白磷酸酶通过使AKT或PIP3去磷酸化，充当AKT蛋白的负调节因子。PI3K/AKT信号通路对肿瘤细胞存活至关重要。存活因子可以通过激活AKT1以转录非依赖的方式抑制凋亡，AKT1然后磷酸化和灭活凋亡机制的成分。AKT蛋白还参与哺乳动物雷帕霉素靶（mTOR）信号通路，该通路控制真核翻译起始因子4F（eIF4E）复合物的组装，除了对生长因子和细胞因子的细胞外信号作出反应外，该通路在许多癌症中也不受调节。该基因突变与多种类型的癌症和过度组织生长有关，包括Proteus综合征和Cowden综合征6，以及乳腺癌、结直肠癌和卵巢癌。已经发现该基因存在多种选择性剪接的转录变体。

▎  别名

AKT; PKB; RAC; PRKBA; PKB-ALPHA; RAC-ALPHA

▎  用途

该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中AKT1浓度。

▎  检测原理

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

▎  特异性

可检测样本中的AKT1, 且与其它类似物无明显交叉反应。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  标曲图

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

▎  精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

▎  稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

▎  试剂盒的组成

▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。

▎  实验所需自备物品

1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  

2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   

3、Eppendorf 移液器.   

4、蒸馏水或去离子水.   

5、脱脂棉吸水纸.   

6、37℃恒温箱.  

7、100ml和1000ml量筒.

▎ELISA操作视频