Human JAK2 ELISA Kit(人酪氨酸激酶 2 ELISA试剂盒)

▎  JAK2 概述

该基因编码一种非受体酪氨酸激酶，在细胞因子和生长因子信号传导中起着核心作用。该蛋白的主要亚型具有促红细胞生成素受体结合所需的N端FERM结构域、结合STAT转录因子的SH2结构域、假激酶结构域和C端酪氨酸激酶结构域。细胞因子结合诱导该激酶的自磷酸化和激活。然后，这种激酶招募并磷酸化信号转导子和转录激活子（STAT）蛋白。生长因子如TGF-β1也诱导这种激酶的磷酸化和激活，以及下游STAT蛋白向细胞核的易位，在那里它们影响基因转录。该基因的突变与许多炎症性疾病和恶性肿瘤有关。该基因是多效性细胞因子IL6的下游靶标，IL6由B细胞、T细胞、树突状细胞和巨噬细胞产生，以产生免疫反应或炎症。IL6/JAK2/STAT3信号通路的紊乱会导致造血干细胞的细胞增殖和骨髓增生性肿瘤增加。该基因假激酶结构域中的非同义突变破坏了结构域的抑制作用，导致组成型酪氨酸磷酸化活性和对细胞因子信号的超敏反应。该基因和IL6/JAK2/STAT3信号通路是治疗病毒感染过度炎症反应的治疗靶点。选择性剪接导致编码不同异构体的多种转录变体。

▎  别名

JTK10

▎  用途

该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中JAK2浓度。

▎  检测原理

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

▎  特异性

可检测样本中的JAK2, 且与其它类似物无明显交叉反应。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  标曲图

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

▎  精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

▎  稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

▎  试剂盒的组成

▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。

▎  实验所需自备物品

1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  

2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   

3、Eppendorf 移液器.   

4、蒸馏水或去离子水.   

5、脱脂棉吸水纸.   

6、37℃恒温箱.  

7、100ml和1000ml量筒.

▎  ELISA操作视频