酶活检测

固氮酶活性检测-乙炔还原法

2026-03-27

实验收费标准:


项目编号项目名称计价单位单价

ZC-2162

固氮酶(nitrogenase)

230元



检测原理:

固氮酶的核心功能是还原 N₂为 NH₃,同时具有广谱还原活性,可将乙炔(C₂H₂)还原为乙烯(C₂H₄)。通过密封体系中通入定量乙炔,反应一定时间后,检测生成的乙烯浓度,结合反应条件计算固氮酶活性,活性单位通常以 nmol C₂H₄·g⁻¹·h⁻¹(每克根瘤每小时生成乙烯的纳摩尔数)表示。


样本准备 :

土壤样品(1.0-5.0 g/样;若需测含水量≥10.0 g/样),干冰或冰袋运输。

根瘤样品(0.1-1.0 g/样),液氮速冻后置于-80℃保存,干冰运输。

菌液样品(1.0-2.0 ml/样),无氮培养基活化后,冰袋运输。


试剂与仪器准备

1.核心试剂(分析纯及以上)

试剂名称

规格要求

乙炔气体

纯度≥99.9%

乙烯标准品

浓度 1000 μmol/L(氮气稀释)

氮气(N₂)

纯度≥99.99%

去离子水

电阻率≥18.2 MΩ・cm

2. 仪器设备

气相色谱仪(岛津GC-2010):配备氢火焰离子化检测器(FID)、

毛细管柱:(HP 30 m×0.32 mm×0.25 μm);

密封反应瓶:10 mL/20 mL 血清瓶(带橡胶塞 );

取样针:1 mL/5 mL 气密注射器;

分析天平:精度 0.1 mg;

恒温水浴锅:控温精度 ±0.5℃;

超声波清洗器:清洗反应瓶;

液氮 / 冰盒:样品运输与短期保存;

真空泵:吹扫反应瓶内空气


数据计算:

1. 乙烯浓度计算

根据样品峰面积,代入标准曲线回归方程,计算反应瓶内乙烯浓度(C,μmol/L)。

2. 固氮酶活性计算公式

 

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