实验收费标准:
| 项目编号 | 项目名称 | 计价单位 | 单价 |
ZC-2162 | 固氮酶(nitrogenase) | 个 | 230元 |
检测原理:
固氮酶的核心功能是还原 N₂为 NH₃,同时具有广谱还原活性,可将乙炔(C₂H₂)还原为乙烯(C₂H₄)。通过密封体系中通入定量乙炔,反应一定时间后,检测生成的乙烯浓度,结合反应条件计算固氮酶活性,活性单位通常以 nmol C₂H₄·g⁻¹·h⁻¹(每克根瘤每小时生成乙烯的纳摩尔数)表示。
样本准备 :
土壤样品(1.0-5.0 g/样;若需测含水量≥10.0 g/样),干冰或冰袋运输。
根瘤样品(0.1-1.0 g/样),液氮速冻后置于-80℃保存,干冰运输。
菌液样品(1.0-2.0 ml/样),无氮培养基活化后,冰袋运输。
试剂与仪器准备:
1.核心试剂(分析纯及以上)
试剂名称 | 规格要求 |
乙炔气体 | 纯度≥99.9% |
乙烯标准品 | 浓度 1000 μmol/L(氮气稀释) |
氮气(N₂) | 纯度≥99.99% |
去离子水 | 电阻率≥18.2 MΩ・cm |
2. 仪器设备
气相色谱仪(岛津GC-2010):配备氢火焰离子化检测器(FID)、
毛细管柱:(HP 30 m×0.32 mm×0.25 μm);
密封反应瓶:10 mL/20 mL 血清瓶(带橡胶塞 );
取样针:1 mL/5 mL 气密注射器;
分析天平:精度 0.1 mg;
恒温水浴锅:控温精度 ±0.5℃;
超声波清洗器:清洗反应瓶;
液氮 / 冰盒:样品运输与短期保存;
真空泵:吹扫反应瓶内空气
数据计算:
1. 乙烯浓度计算
根据样品峰面积,代入标准曲线回归方程,计算反应瓶内乙烯浓度(C,μmol/L)。
2. 固氮酶活性计算公式
