▎ 产品简介
总蛋白(Total Protein,TP)由白蛋白和球蛋白组成,对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定,一般要基于如下两个假设:1、所有蛋白质分子由纯多肽组成,含氮量的质量百分比为16%;2、体液中含有数百个蛋白质分子,每个分子对测定反应都具有非常相似的特性,目常用的检测总蛋白的方法有:双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。
总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定,双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下,肽键与铜离子结合,生成蓝紫色的化合物,此化合物在540nm的吸光度与肽键的数量呈正比例关系,因此可计算出蛋白质的含量,双缩脲法测蛋白浓度兼容性亦很好,不受大部分样本中其他成分的影响,但易受铜离子螯合剂的影响,另外对于血清总蛋白的双缩脲分析,胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用,双缩脲法在5~160mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途.
▎ 注意事项
1. 蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后,即获得蛋白标准原液,该原液中含有防腐剂,不影响后续检测,该蛋白标准原液-20℃长期保存。2. 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后,如果发现检测效果不佳,可以室温放置1h或60℃放置15min,颜色会随着时间的延长不断加深。3. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化,可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂。
4. 蛋白浓度低于20mg/ml时,颜色反应呈不明显的蓝色;当大于40mg/ml时,即可呈现明显的蓝紫色反应。
5. 该试剂盒的线性范围是5~160 mg/ml,样品蛋白浓度应大于1mg/ml,以20mg/ml以上为宜;如需测定低浓度蛋白样品(1mg/ml),请选用BCA蛋白定量试剂盒或微量BCA蛋白定量试剂盒。
6. 该试剂盒反应生成的蓝紫色的化合物的吸光度,与试剂批次、pH值、反应温度有关。因此建议,每次测定都做标准对照。
7. 氨基酸和二肽不发生双缩脲反应,三肽、寡肽和多肽与铜离子的双缩脲复合物,呈粉红色-紫红色,与蛋白质的双缩脲反应结果不同。
8. 如果没分光光度计,也可以使用酶标仪测定,使用酶标仪测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量会显著增加。
9. 检测中发现所有孔都呈暗紫色,可能原因是样品含有还原剂,应适当透析或稀释样品。
10. 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
有效期:12个月有效;室温运输,按要求保存。